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酵母文库/酵母杂交Tips7 膜体系功能验证

膜体系筛库前,需对诱饵蛋白在酵母细胞中是否正确表达进行检测,即功能验证(functional assay),实验中用到的对照AD载体为pOst1-NubI。如果诱饵蛋白在酵母细胞中正确表达,并定位到酵母细胞膜上,同时与诱饵蛋白融合的Cub-LexA-VP16结构定位于细胞质侧,则其将与Ost1-NubI结构域互作,从而形成完整的泛素,激活报告基因表达。

实验设计

通过标准

Ø如果诱饵蛋白在该体系中正确表达,即构建的BD载体适应该体系,反应1在SD-trp-leu-his和SD-trp-leu-his-ade培养基上的生长率应达10%-100%。

Ø如果诱饵蛋白不存在自激活,反应2在SD-trp-leu-his和SD-trp-leu-his-ade培养基上应无显著生长。

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