标准品加样
　　设置标准孔和样孔，各加不同浓度标准品，分别设空白孔，待测样品孔。在酶标包被版上待测样品孔中先加样品稀释液，再加待测样品。加样时尽量不触及孔壁
　　
　　加酶温育和配液
　　每个孔加入酶标试剂，空白孔除外，用封板膜封板后置于37C温育60分钟，而后配液，将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
　　
　　洗涤
　　小心揭掉封板膜，丢弃掉液体，甩干，每个孔中加满洗涤液，静置30秒后丢弃掉，如此重复5次，每次清洗后都要拍干
　　
　　显色
　　每个孔先加入显色剂A，而后加入显色剂B，轻轻的震荡混匀，37C避光显色15分钟（可放在37C恒温箱中进行避光处理）
　　
　　终止
　　每个孔加终止夜，终止反应，此时可以看到液体的颜色由蓝色立马转为黄色，且黄色较淡，如图中所显示的颜色所示
　　
　　测定
　　在加终止夜的15分钟以内，以空白孔凋零，450nm波长依序测量各孔的吸光度OD值，以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘制标准曲线，就可进行计算了

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