稳定同位素MedChemExpress

　　稳定同位素质谱内标定量的极佳选择
　　质谱分析具有灵敏度高、样品用量少、分析速度快、分离和鉴定同时进行等优点。随着质谱定量检测技术的广泛发展，稳定同位素类化合物作为内标定量（StableIsotopeLabeledInternalStandard，简称SILIS）目前已被公认为是质谱定量分析领域的极佳选择。因为稳定同位素类化合物与被分析物具有几乎完全相同的分子结构（图1）、化学性质、色谱和质谱行为，可以有效地消除电离变化和基质效应〔1〕，因而受到越来越多科研人员的推崇，广泛用于临床医学研究及生物医学、环境科学、食品检测等领域。
　　图1。未标记的依喜替康甲磺酸盐（左）同位素标记的依喜替康甲磺酸盐d5（右）
　　稳定同位素作内标，可以减少基质效应、减少实验的人为误差、提高检测的准确度和精密度、同时检测多个数据、提高实验效率，好处多多。那么稳定同位素作为内标的关键量值指标有哪些，该如何挑选稳定同位素内标呢？干货如下，拿走不谢
　　1。稳定同位素作为内标的关键量值指标
　　a。同位素产品纯度：一般98。常指色谱纯度，如LCMSMS，GCMS，HPLC等，如果产品吸收或者MS较弱，也可以用NMR检测等。
　　b。同位素产品丰度（IsotopicEnrichment）：一般98。
　　c。同位素产品有效期：同位素化合物内标均在有效期内使用。
　　2。如何挑选稳定同位素内标
　　a。除非实验特殊需求下，一般不选择有活泼氘（2H）取代的同位素产品作内标（如氨基、羧基、羟基上的氢被氘取代），这些活泼氘极易被交换为氢。
　　b。同位素标记的13C和15N化合物稳定性较好，但是13C和15N的价格相对较贵些。目前市场上含有氘（2H）的同位素产品因为价格相对便宜且数量相对较多，因此在满足实验要求的情况下，也可选择氘代物作为内标。
　　c。选择氘（2H）代化合物作为内标时，一般选择比非同位素产品分子量多3及以上的产品〔即含有氘原子个数为3个（D3）或者以上〕。
　　稳定同位素的应用
　　在有机分析研究中，质谱分析法比化学和光学分析法具有更加卓越的性能，而稳定同位素作内标成为了质谱定量的金标准，下面就随着小M来看下稳定同位素内标在质谱定量分析中的实际应用吧
　　一、糖尿病人视网膜病变治疗研究中的应用
　　Candesartan和Irbesartan已被证明能有效预防糖尿病视网膜病变造成的损伤。为了开发新型治疗此疾病的滴眼剂配方，TanA等人利用Candesartand4Irbesartand4稳定同位素做内标，开发了一种新的LCMSMS方法，此方法可同时定量测定出兔眼组织中CandesartanIrbesartan的含量，并对该方法的浓度范围、准确度及精密度、基质效应、样品回收率等均做了验证。该方法也已成功应用于家兔的体内生物分布和药代动力学研究〔2〕。
　　图2。Candesartan和Candesartand4，Irbesartan和Irbesartand4的化学结构
　　图3。稳定同位素类化合物做内标实验流程图
　　那么如何操作呢？实验的具体过程如下：
　　（1）CandesartanIrbesartan标准液及其同位素内标液制备
　　在乙水（8020，VV）中配置CandesartanIrbesartan的标准液和内标液，标准液分配成200和500gmL，内标液配置500gmL备用，放置于20备用。
　　（2）样品前处理
　　称量好的兔眼组织样品在稀释的兔血浆中以1：19的比例混合均匀，其匀浆上清液保存于80。取200L的兔组织匀浆上清液依次与100L内标液溶于甲醇水（20：80，VV）和水混合。然后将混合物装载到预处理的HLB柱中洗脱。洗脱后的纯品用200L甲醇水甲酸（70：29。75：0。25，VVV）复溶。
　　（3）LCMSMS分析样本
　　将（2）中稀释好的的样品20L注入C18柱进行梯度分离，柱温25，流速0。8mLmin。Candesarta和Candesartad4在5。1min洗脱，Irbesartan和Irbesartand4在4。1min洗脱。MS检测采用正电喷雾电离（ESI）模式。
　　（4）数据分析
　　通过分析六批次456个兔组织样本，用Candesartand4Irbesartand4做内标，准确测定了兔组织样本中在角膜、房水和玻璃体样本中的精确含量，测定出Candesartan在角膜中含量为1704。75ngg，在房水中的含量为63。45ngg；Irbesartan在角膜中的含量为3546。30ngg，在玻璃体中的含量为36。52ngg。
　　图4。Candesartan在角膜和房水样本中的
　　LCMSMS色谱图
　　通过分析六批次456个兔组织样本，用Candesartand4Irbesartand4作内标，准确测定了兔组织样本中（角膜、房水和玻璃体）的精确含量，测定出Candesartan在角膜中含量为1704。75ngg，在房水中的含量为63。45ngg。
　　二、COVID19药物治疗研究中的应用
　　全球COVID19爆发以来，对此疾病的药物治疗研究备受科研工作者的重视。据报道，Ibuprofen可以有效缓解与COVID19相关的症状。Ibuprofen的疗效及其不良反应与其在血液中的浓度密切相关，所以准确定量测定Ibuprofen在血液中的浓度至关重要。
　　图5。Ibuprofen和Ibuprofend3的化学结构
　　ChangmaoWang等人用稳定的同位素标记Ibuprofend3做内标简单、高效、准确地定量测定人血浆中的Ibuprofen含量，该方法不但检测时间短，且无基质效应及个体间差异性的影响，已成功应用于18名健康中国志愿者口服Ibuprofen颗粒后的临床药代动力学研究，其结果证明了Ibuprofen可以改善COVID19免疫反应并缩短患者的康复时间〔3〕。
　　图6。Ibuprofen及Ibuprofend3在血脂、
　　溶血和人血浆中的基质效应表，
　　显示Ibuprofend3作内标基质效应无影响
　　跟着M君已经了解了这些稳定同位素内标在质谱定量分析中的应用，您目前是否也想尝试下稳定同位素产品在实验中的应用呢？下面就让M君带您浏览下MCE稳定同位素类产品吧！
　　相关产品Exatecand5（mesylate）
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　　MCE的所有产品仅用作科学研究或药证申报，我们不为任何个人用途提供产品和服务
　　参考文献
　　1。UlvikA，UelandPM，etal。QuantifyingPrecisionLossinTargetedMetabolomicsBasedonMassSpectrometryandNonmatchingInternalStandards。AnalChem。2021Jun1；93（21）：76167624。
　　2。TanA，FanarasJC，etal。Simultaneousquantificationofcandesartanandirbesartaninrabbiteyetissuesbyliquidchromatographytandemmassspectrometry。BiomedChromatogr。2020May；34（5）：e4808。
　　3。WangC，JiaY，etal。EstablishmentandvalidationofanSILISLCMSMSmethodforthedeterminationofibuprofeninhumanplasmaanditspharmacokineticstudy。BiomedChromatogr。2022Mar；36（3）：e5287。