浴冰重生来自一个标本的自白

　　传说，
　　凤凰是人世间幸福的使者。
　　每五百年，
　　它就要背负着
　　积累于人世间的所有不快和仇恨恩怨，
　　投身于熊熊烈火中自焚，
　　以生命的美丽终结
　　换取人世的祥和与幸福。
　　在肉体经受了巨大的痛苦和轮回后
　　它们才能以更美好的躯体重生。
　　然而，
　　我不是凤凰。
　　我只是一个标本。
　　我的主人正被痛苦的癌症折磨，
　　为了减轻她的疼痛，
　　我必须牺牲自己。
　　烈火，
　　或冰冻，
　　总要选择一种死的方式。
　　烈火让你灰飞烟灭，
　　冰冻却能让我活成永恒，
　　美其名曰重生。
　　然而
　　听医生说，
　　即使是冰冻，
　　死的方法也有很多种。
　　最快捷、简便的要数冰冻切片了，
　　它还可以用于手术中的快速病理诊断。
　　1hr干脆一点的比如直接冰冻切片法多用于新鲜组织、甲醛固定组织和冰箱冷藏组织等。组织块不经任何包埋剂而直接放在制冷台上冷却后再进行切片，如恒冷箱切片、甲醇制冷器制冷箱切片、二氧化碳冰冻法切片、半导体制冷冰冻切片等。
　　2hr如果标本很脆弱或者有树枝状突起（当切片后投入水中时，常常引起分散，甚至发生丢失；如果间隙较多，还会因发生散乱而失去相互间的联系造成移位）则可以尝试明胶冰冻切片法。
　　3hr或者选择冰冻切片粘片法三种中的任一种。
　　3。1蛋白甘油粘片法
　　烘烤的温度不超过40，
　　待烤干后立即取出，
　　因为时间过久或温度过高切片都容易破碎。
　　烤干后用70乙醇及蒸馏水洗后即可染色。
　　3。2Lillie明胶粘片法
　　则是将切片放入1明胶水溶液数分钟，
　　捞出置于载玻片上，
　　将多余液体倾去。
　　入环保组织固定液中
　　固定5min，水洗10min，即可染色。
　　3。3乙醇明胶粘片法
　　则需将切片浸入
　　0。1或0。75明胶溶液
　　（以40乙醇配制）
　　数分钟，
　　捞于载片上，
　　经室温短时干燥，
　　入氯仿1min，
　　经95及70乙醇洗去氯仿，
　　再经蒸馏水洗后染色。
　　他们又说
　　现在国内外有许多厂家
　　用高分子材料
　　配制成了冰冻切片包埋液，
　　可直接在切片机组织卡盘（chuck）上
　　加少许包埋液，
　　在其固化前将标本嵌入，
　　然后周围加入少许包埋液稳定。
　　常规切片厚度为2100微米。
　　或者
　　在盛标本的包埋模具内，
　　挤出适量冰冻包埋液，
　　将标本放入后再加包埋剂完全淹没，
　　如有气泡则用针头或吸头吸出。
　　然后将装有标本和包埋液的模具，
　　正置于切片机冷室内冰冻10分钟，
　　至包埋液固化。
　　也可将模具置于液氮或4070度冰箱冰冻固化保存。
　　突然觉得，
　　原来死也是一件极其麻烦的事情。
　　正当我犹豫不决的时候，
　　很多已经重生的小伙伴，
　　走到我身边，
　　给我说了它们自己的故事。
　　原来
　　小A的出现是因为在手术进行中，医生突然发现它主人的病变与原诊断和原定手术方案不相符合；
　　小B的使命是为了了解淋巴结内是否有转移的淋巴细胞或者转移的程度，以利于确定是否需要彻底扫除淋巴结或者采取其他的治疗措施；
　　小C需要帮一个恶性肿瘤患者了解其手术范围是否足够，上下切缘是否有残存的肿瘤组织；
　　小D诞生于一个病人在做剖腹探查时发现的肿块；
　　小E给我展示了它身上的的脂肪和脂类物质，它们来源于脂肪瘤、肉瘤或某些科研组织等；
　　小F身上，有一些酶，比如ATP酶，琥珀酸脱氢酶等。
　　小G身上特殊的染色效果，据说是用Eager氏法和Marchi氏法获得的。
　　听完了大家的诉说，
　　我坚定了自己成为冰冻切片的决心，
　　便毫不犹豫地推开了白衣天使的门。
　　他们马上召集了
　　冰冻切片领域的专家，
　　召开了一个座谈会。
　　院长首先发话：
　　为了让顾客更好地了解我们要做的事，
　　现在请各部门负责人阐述一下手术过程。
　　第一步，是取材。
　　A：取材的时候我们会尽量保持刀具与台面的干燥，避免标本与水接触，即使标本中含有水或者血性液体，我们也会用干燥的纱布或者滤纸把水吸干，这样可以提高切片的质量从而防止空洞、冰晶等现象的出现。
　　B：由于脂肪组织不易于切片，我们在取材时会尽量去除。
　　C：取材时也会注意标本结构的完整性，会带有背膜、皮质、髓质或者内膜等结构。
　　D：此外，还会考虑标本结构的方向性以及标本切片的方向性，如肾标本的取材，标本的截面会包括肾背膜、肾皮质、肾髓质3种结构。若您没有立刻切片的要求，我们则可以先清理然后快速放入液氮保存。
　　A：取材后会对标本进行包埋、切片、固定等前期处理。
　　快速冷冻可以有效降低冰晶的形成。新鲜的组织要快速冷冻，一般情况下，较硬组织如子宫肌瘤要冷冻12分钟，软组织以及细胞丰富的组织如肝、脾和淋巴结等需要24分钟，脂肪组织需要56分钟，脂肪组织的切片厚度要达到810um才更有利于观察。
　　现常用的冰冻包埋液是由高分子聚合物组成的透明粘稠液体，速冷时固化，其冰冻速度和软硬韧度与组织细胞相近，因此能保证最佳的组织细胞形态，并具有支持填充、减少皱褶和断裂的作用，能切出23微米的超薄切片。这个您可以放心。
　　温度过低、过高会导致组织块过硬或者硬度不够，从而影响切片质量，产生搓板状、梯田状、厚薄不均、破碎及粉末状现象。根据不同组织的形态和组成成分的不同，未固定的组织合适的对应温度大致如下：乳腺、卵巢、子宫等：2025；胃肠等：1820；甲状腺、肝、肾、脾等：15左右；脂肪组织一般在35以下。固定好的组织合适的温度一般为1217。
　　切片时会提前将锋利的刀片调节合适的角度安在刀架上，会保证切片刀在适宜的温度下，以防止切片粘连。用力会均匀、柔和，也会防止污染及切片皱褶，尽量切到组织最大面，为了切到病理部位，必要时可能要连续切片，然后用刷子辅助展开切片，沾在载玻片上。片子沾好后，就立刻将它浸没于固定液中。固定液种类很多，常用的有冰丙酮、多聚甲醛、环保组织固定液等。如果组织固定延迟会出现风干的假象，当组织片粘在有温度的玻片上时就会出现明显的风干假象，表现为核的细节丢失及胞浆液的溢出。我想这一点您也需要了解并做好心理准备。
　　看着他们口若悬河胸有成竹的样子，
　　我顿时充满了信心。
　　会议结束后
　　主刀医生递给了我一份手术合同，
　　我从头到尾看了一遍，
　　发现合同的末尾明确写了
　　冰冻切片的常见问题及解决方案：
　　如下所示：
　　1切片的厚度：
　　一般情况推荐切6um厚，这种厚度使染色更加饱满，层次清晰，6um的片子可以有更多的时间去避免风干假象，也会减少冰晶所造成的细胞核空洞。特殊情况下可能需要更厚或更薄的片子。
　　2脱片现象：
　　脱片一般有以下几种情况：
　　（1）本身非常干燥或过度脱水的组织；
　　（2）组织片的周长与面积比过大，像细条形的组织容易受染色缸内液体涡旋应力的影响而脱落，同样包括薄的纤维囊肿及不规则的坏死组织，太厚的组织也不例外；
　　（3）少数情况需要使用100的乙醇固定；
　　（4）一张玻片贴多个片子时，片子周围的包埋物相互重叠；
　　（5）组织内含过多的坏死组织，组织细胞坏死崩解后，局部的渗透压升高，吸收水分，切片一经固定，水分溢出，坏死组织失去支撑作用，染色时容易脱落；
　　（6）固定液浓度过低；
　　（7）载玻片不干净。
　　3冰晶的形成：
　　含水量特别多的组织冷冻时会出现肥皂泡样的空隙，主要是因为组织中的水分凝固时形成球形的冰晶，挤压纤维组织条而产生泡沫样的形状。组织片在进一步处理时泡沫样的水分又重新分布于间质，而未曾冷冻的组织显示出间质的水肿。这些水分巨多的组织在切片时很难保证不裂开，应尽可能提高切片的温度。
　　4冰冻假象：
　　组织在冰冻时候的变化与水结冰膨胀是密切相关的，细胞实性的组织会受到冰泡膨胀的挤压，这在水肿组织非常明显。有些组织细胞浆内会出现一些空泡，也是冰冻假象的一种。
　　如此周全的考虑
　　已经完全消除了我的后顾之忧，
　　于是，
　　我愉快地签下了自己的名字。
　　静待重生。
　　手术很成功，
　　所以，
　　我又可以在这里和你们说话了。